Extracción, Separación e Identificación de Algunos Fitoesteroles, Saponinas y Flavonoides Presentes en el Frijol Negro (Phase vulgaris)-Edición Única

Abstract

Las plantas contienen gran cantidad productos naturales entre ellos están los metabolitos secundarios, algunos de los cuales les proporcionan a los alimentos algún tipo de "funcionalidad" o beneficios para la salud humana. A estos compuestos se les denomina nutraceúticos. La fitoquímica es la parte de la química que permite aislar e identificar estos principios activos de las plantas. El objetivo de este trabajo es caracterizar y analizar fítoquímicamente al frijol negro para identificar algunos de sus metabolitos secundarios como son los fitoesteroles, saponinas y flavonoides, los cuales se han relacionado con la prevención y el tratamiento de enfermedades crónico-degenerativas, como la hipercolesteronemia y el cáncer. Como materia prima se utilizaron las testas del frijol negro, variedad Brunca, costarricense. El desarrollo de la caracterización de los compuestos se dio en cuatro etapas: extracción, separación, identificación y bioensayos en células cancerígenas (MCF-7). A partir de 80g de testa se obtuvieron dos extractos crudos: etanol al 70% y metanol al 80%. También se analizó el agua de remojo utilizada para remover a las testas. Las técnicas de separación y purificación de las sustancias extraídas se llevaron a cabo realizando diferentes técnicas cromatográficas sencillas como en CLC, TLC o TLC preparativas. A cada fracción resultante se le realizaron pruebas físicas y químicas caracterizando a los compuestos de interés (saponinas, flavonoides y esteroles). En la etapa de identificación se utilizaron diferentes métodos cromatográficos (HPLC-UV, HPLC-PDA y GC-MS) con los cuales se obtuvo información sobre la estructura molecular permitiendo identificar de forma parcial o total a cada compuesto. A las fracciones que contenían los metabolitos se les realizó bioensayos con células cancerígenas de mama, para así determinar la bioactividad de cada uno de los extractos y fracciones. Se obtuvieron 5,45%, de sólidos a partir del extracto etanólico de las testas. Por otro lado, se obtuvieron 2,05% y 1,05% del extracto metanólico y del agua de remojo, respectivamente. En las fracciones metanol, acetona y mezclas de ellos, resultantes de la columna de fraccionamiento de los extractos crudos, se identificaron un grupo de compuestos, entre ellos los flavonoides: kaempferol, rutina, quercetina, catequina, miricetina, luteolina y malvidina y una, isoflavona identificada como daizeína. Por otro lado, de las fracciones solubles en cloruro de metileno, hexano, acetona y mezclas de ellos se identificaron 7 fitoesteroles: el stigmasterol, ysitosterol, campesterol, stigmasta-5,22-dien-3p-ol, etilcolest-5-en- 3|3-ol, 23S-metilcolesterol y 23S-ergost-5-en-3(J-ol. Se identificó tentativamente una sapogenina con el nombre de al olean-12- en-3p\22p\24-triol. La fase butanólica y el extracto crudo etanólico al 70% fueron los que presentaron más alta capacidad inhibitoria sobre el crecimiento de células cancerígenas de mama (MCF-7), a una concentración de 4 mg/ml se logró una inhibición del 94 y 96%, respectivamente.