Efecto de la proteína MRJP1 producida en Pichia pastoris y recuperada mediante cromatografía, sobre proliferación celular y producción de galsulfasa

Abstract

Major Royal Jelly Protein 1 (MRJP1) es la proteína mayoritaria de la jalea real, fuente de alimentación exclusiva de las abejas reinas en la colmena. El consumo de jalea real propicia el incremento en tamaño del cuerpo, longevidad y fertilidad en las abejas reinas (efectos que ocurren también en otros organismos). Según estudios previos, MRJP1 posee un efecto mitogénico en hepatocitos primarios de rata, por lo que su estudio extendido en células de mamífero es crítico para determinar su función y potenciales aplicaciones. Entre las células de mamífero más utilizadas como modelos experimentales se encuentran los fibroblastos y las células CHO (células de ovario de hámster chino). Los fibroblastos son células adherentes utilizadas generalmente como línea celular control en ensayos donde se pretende demostrar la actividad de ciertas moléculas de interés. Las células CHO son un modelo de células no adherentes empleado principalmente en la producción de proteínas recombinantes que requieren modificaciones postraduccionales. Uno de los principales retos de investigación en células CHO ha sido encontrar nuevas estrategias capaces de incrementar la generación del producto de interés. Cabe mencionar que los fibroblastos poseen el receptor EGFR (ausente en células CHO) que se cree está involucrado en la vía de señalización por la cual actúa MRJP1. Por tal motivo, en el presente trabajo se empleó una estrategia para evaluar el efecto en cultivos de células de mamífero (CHO-pGAP, línea modificada para producir galsulfasa, y fibroblastos dérmicos humanos) expuestos a la proteína MRJP1, obtenida de manera recombinante en Pichia pastoris, como alternativa a la extracción a partir de jalea real. Para la recuperación y caracterización de MRJP1 partiendo directamente del sobrenadante de Pichia pastoris, se utilizaron diferentes técnicas cromatográficas: en fase reversa (RPC), de exclusión molecular (SEC) y de intercambio iónico (IEX). En todas las técnicas se encontró a la proteína de tamaño de 57 kDa (MRJP1), además de contaminantes atribuidos al medio de cultivo. Sin embargo, el cromatograma correspondiente a SEC acoplado a IEX evidenció un único pico atribuido posiblemente a una proteína única. Por otra parte, en los experimentos con células CHO-pGAP, se encontró que MRJP1 incrementa en un 30% el número de células, y la producción de galsulfasa en un 54%. Respecto a los cultivos de fibroblastos dérmicos humanos, no se encontró efecto significativo por parte de MRJP1. Se sugiere que el suplemento de cultivos de células CHO con MRJP1 podría ser una alternativa potencial al uso de factores de crecimiento y aditivos complejos, comúnmente empleados para incrementar la producción de proteínas recombinantes.